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健脾疏肝活血化瘀法对人肝癌细胞裸鼠复种移植瘤的抑制作用观察

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第 6 卷第 6 期 2000 年 6 月

湖南中医药导报
Hunan Gui ding Journal of TCMP

Vol. 6 No . 6 Jun. 2000

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实验室报告

健脾疏肝活血化瘀法
对人肝癌细胞裸鼠复种移植瘤的抑制作用观察
Observati on of Inhibition Effects of Spl een Invigoration and Liver- qi De pressi on eli ef, Promotion of Blood Circulati on by Removing Blood Stasis Method on Infusion of HumanHe patocarci noma Tumor- Causing Cel ls into Nude Mice 1 2 3 朱梅菊 , 郭振球 , 唐发清 1 2 3 Zhu Mei ju , Guo Zhenqiu , Tang Faqi ng ( 1. 广东湛江师范学院运动人体科学教研室, 广东湛江 524048; 2. 湖南中医学院中医诊断研究所, 湖南长沙 410007; 3. 湘雅医院中心实验室, 湖南长沙 410008) ( 1. Guandong Provincial Zhanj ian Teachers Col le ge, Zhanj ian Guangdong 524048; 2. Hunan Coll ege of TCM, TCM Di agnostic Research Institute , ChangshaHunan 410007; 3. Central Laborator y of Xi angya Hos pi tal, ChangshaHunan 410008) 摘要: 目的: 探讨健脾疏肝活血化瘀药物对人肝癌细胞复种移植瘤在裸鼠体内的抑瘤作用。方法: 建立肝癌 ( H e pG 2) 小鼠模型, 观察不同组方的健脾疏肝活血化瘀药物对其肿瘤的影响。 结果: 号方( 黄芪、 柴胡、 莪术等) 与 号方 ( 黄芪) 、 号方 ( 柴胡) 、 号方( 莪术) 相比, 其肿瘤体积和体重以及抑瘤率的治疗后、 治疗前后差值, 均有显著性差异, P 均< 0. 05。 号方( 蒸馏水) 与 、 、 、 号方治疗后、 治疗前后差值比较, 亦有显著性差 异。结论: 健脾疏肝活血化瘀药物有明显的抑瘤作用, 且健脾疏肝活血化瘀法明显优于益气健脾法、 疏肝理气法 和活血化瘀法; 从而, 从治*嵌冉徊椒粗ち烁斡羝⑿椤 瘀血内阻是原发性肝癌的主要病机。 关键词: 人肝癌细胞; 健脾疏肝活血化瘀法; 移植瘤
Abstract : O bjective : To explore th e an ti- t um or ef fect of spleen invigoration and liver- qi depression relief , rom otion of blood circulat ion by removing blood st asis ( IRPR) drug s on t rans plan ted tu mor in vivo of nude mice. p M et hods: T he model of He pG2 h epatocarcinom a m ice w as produced and treat ed w ith different com binations of drugs for IRPR . T he inf luence on tu mors w as observed. Result s: T he tum or volum e, w eight and ant i- tu mor rat e af ter treatm ent , its differences bef ore an d af ter treat ment in Group ( Ast ragalus, Bupleurum , Zedoary, et al. ) , all had signif icant differences from Group ( Astragalus) , Group II ( Bupleuru m) , Grou p III ( Zedoary) , P< 0. 05. T hat of Group ( Dis tilled w at er) also had si g nificant diff eren ces from t hose of Groups , , , . Conclusion: IRPR had obvious an ti- tum or ef fects, m oreover, the IRPR m ethod w as si g nificantl y sup erior to t he m et hod of s pleen- invi go rat ing qi- supplem ent at ion , the depressed liver relief m ethod, t he meth od of blood circulation promot ion by removal of b loods tas is; t hus t he leading pat hogenesis of prim ary carcinoma of t he liver w as thestagnat ion of t he liver- qi an d de fici ency o f the spleen, and accumulat io n of blo od st asis w as fur ther dispr ov ed fro m the t rea tment angle. Key words: H um an hep ato ca rcinoma cells; I RP R; T r ansp lantat io n t um or

我们 已往的研 究表明 健脾疏 肝活 血化瘀 药物对 人 肝癌细胞 ( He pG 2) 的体外生长具有明显的抑制作用 1 。 为
进一步观 察该方 的体内 抑瘤作 用, 我们以 人肝癌 细胞 ( H epG 2) 裸鼠复种移植瘤为模型进行了研究。 1 材料与方法



号方( 黄芪、 柴胡、 莪术等) , 按常规煎煮法分别制 冰箱保存备用。

成药物煎剂浓缩液, 置 4 1. 3 细胞株及培养条件

人肝癌 H epG 2 细胞株由湖南医科大学肿瘤研究所细 胞培养中心提供, 接种于含 15% 灭活小牛血清、200u / ml 青霉素、 200u g/ m l 链霉素的 RPM I1640 培养液中, 置 CO 2 培养箱于 5% C O 2、 , 充分湿化条件下培养传代。 37

1. 1 动物 BA CB/ c 裸鼠, 兼用, 体重 16~ 22g , 鼠龄 4~ 5 周, 共 17 只, 购自中国科学院上海实验动物中心。 1. 2 药物组方及其制备方法 将 号方 ( 黄芪) 、 号方 ( 柴胡) 、 号方( 莪术)

1. 4 人肝癌细胞裸鼠复种移植瘤实验模型的建立、治 疗及标本处理 将人肝癌 HepG 2 细胞接种到 17 只裸鼠腋部皮

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湖南中医药导报
体积差值比较, 无显著性意义。见表 1。

第 6卷

下组织, 每只 0. 1~ 0. 2ml( 含 1 10 7 个癌细胞) , 置超 净生物台中无菌饲养, 经 3 周左右潜伏期, 17 只裸鼠 全部长出肿瘤, 待肿瘤长至直径约 0. 8cm 时, 模型制 作成功, 随机分为 5 组, 分别灌喂 、 、 、 号方煎 液和对照物蒸馏水 ( ) , 继续每日观察裸鼠的活动, 测量肿块的大小。 治疗 30 天后, 处死动物, 解剖肿瘤, 称量瘤重, 按公式计算抑瘤率, 并作比较。 2 结果 2. 1 动物移植瘤体积比较 用药各组治疗前后移植瘤体积差值分别小于空 白对照组; 号方组治疗前后移植瘤体积差值分别小 于 、 、 号方组; 、 、 号方组治疗前后移植瘤

组与 、 、 、 组治疗后、 治疗前后差值比 较, P< 0. 01。 组与 组、 组、 组治疗后、 治疗 前后差值比较, P < 0. 05。

组与 、 、 组比较, P < 0. 05。 2. 2 各组移植瘤瘤重比较 治疗后用药各组移植瘤瘤 重均轻于空白对照组, P < 0. 05 或 P< 0. 01, 号方组移植瘤瘤重轻于 、 、 号方组, 均 P < 0. 05, 见表 2。 2. 3 各组抑瘤率比较 组抑瘤率高于 、 、 组, 均 P< 0. 05, 差异有显 著性意义。 、 及 组抑瘤率相互比较, 均 P > 0. 05, 差异无显著性意义。见表 3。 3 讨论 根据原发性肝癌的临床表现及病程进展规律, 笔者 认为本病属于中医 肥气 、 痞气 等范畴。其病因病机 多与肝脾失调、 气血运行失常等有关, 诸病源候论 云: 痞气, 肝病传脾, 脾当传肾, 肾冬适王, 王者不 受邪, 脾欲复还于肝, 肝不肯受, 故留结为积 , 指出肝病 传脾、肝脾同病与本病发生的关系。至清 王清任首次 指出瘀血在本病发生中的作用, 他在 医林改错 中提出 肚腹结块, 必有形之血 , 导师郭振球教授通过长期的 肝病 临床实践 亦认为 肝郁 脾虚瘀 血内 阻乃原 发性肝 癌 的主要病因、 病机, 治宜健脾疏肝活血化瘀, 取黄芪益气

健脾, 伍柴胡疏肝理气, 配莪术活血化瘀等。诸药合用, 共达健脾疏肝活血化瘀之功。 本项研究结果表明, 组对 HepG 2 的体内抑瘤率明 显高于 、 、 组, 提示健脾疏肝活血化瘀法治疗肝癌明
显优于益气健脾法、 疏肝理气法和活血化瘀法, 从治*嵌 进一步反证肝郁脾虚瘀血内阻是原发性肝癌的主要病机。 现代药理研究表明, 黄芪之有效成分黄芪多糖对小鼠体内 六种细胞系瘤株有抑瘤作用 2 , 莪术之有效成分榄香烯能 3 诱导白血病 H L - 60 和 K 562 细胞的凋亡 , 柴胡之生理活 性成分柴胡皂甙 对小鼠艾氏腹水癌有抑制肿瘤生长作 4 用, 且能明显延长动物的生存时间 。故诸药配伍后, 具有 明显的抑制 H ep G 2 体内生长的作用。

参考文献
1 2 林秋芳, 朱梅菊, 郭振球 . 新制抗癌方对人肝癌细胞 ( H epG 2 ) 体 马占好, 张春艳, 刘旭, 等 . 黄芪多糖对小鼠体内六种细胞系瘤 外生长的抑制作用 . 湖南中医学院学报, 1999, 19( 2) : 6 株抑瘤作用的实验研究 . 中医药学报, 1996, 23( 4) : 55 3 杨骅, 王仙*, 郁琳琳, 等 . 榄香烯抗癌作用与诱发肿瘤细胞 凋亡 . 中华肿瘤杂志, 1996, 18( 3) : 169

4 黄泰康 . 常用中药成分与药理手册 . 北京: 中国医药科技出 版社 . 1994 ( 收稿日期: 1999- 12- 29)




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